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所有 Elabscience 旗下 ELISA 试剂盒统一采用双抗体夹心反应模式，核心检测逻辑具备一致性，不同指标仅更换对应特异性捕获抗体与检测抗体。酶标板提前预包被目标蛋白特异性捕获抗体，实验时向孔内加入标准品或待测生物样本，样本中目标细胞因子会与固相捕获抗体特异性结合，充分洗涤去除未结合杂质后，依次加入生物素化检测抗体与 HRP 标记亲和素，依靠生物素与亲和素的特异性结合形成稳定免疫复合物，再次洗去游离试剂后加入 TMB 显色底物，底物在 HRP 酶催化下产生蓝色显色反应，滴加终止液后颜色转为黄色，通过酶标仪读取 450nm 波长吸光度数值，目标蛋白浓度与吸光度数值呈正向关联，依靠梯度标准品绘制拟合曲线即可换算样本内蛋白含量，整套实验完整耗时约 3.5 小时。
实验前的预处理分为样本处理与试剂盒试剂平衡两部分，也是保障 ELISA 试剂盒检测稳定的前置步骤。适用样本包含血清、EDTA 抗凝血浆、细胞培养上清液等生物体液，血液样本采集后及时低温离心分离上清，避免溶血、高脂、反复冻融样本，这类样本会提升非特异性显色背景，干扰最终读数。试剂盒取出后放置室温环境平衡 20 分钟以上，仅取出本次实验需要使用的可拆卸酶标条，剩余板条密封避光保存；浓缩洗涤液为 25 倍浓缩规格，若低温存放出现晶体析出，温水浴溶解后用去离子水稀释至工作浓度，现配现用；冻干标准品加入配套稀释液静置溶解，再进行梯度倍比稀释，稀释后的标准工作液建议 2 小时内使用完毕。
整套实验分步操作中，洗板流程、孵育温度、避光显色是控制背景值的关键。每完成一次抗体孵育步骤，均使用稀释后的洗涤液充分浸泡微孔，倾倒液体后在吸水纸上轻拍去除残留液体，重复多次洗板操作，减少游离试剂残留造成的背景偏高；所有孵育步骤统一控制 37℃恒温环境，孵育过程使用配套封板覆膜密封微孔，防止液体蒸发、交叉污染；TMB 底物溶液对光线敏感，加底物后全程避光孵育，显色完成添加终止液，半小时内完成酶标仪读数，延迟读数会导致数值漂移，影响标准曲线拟合结果。
ELISA 试剂盒各组分具备差异化储存条件，未拆封完整试剂盒短期 2-8℃存放不超过一周，若存放周期更长，需要拆分各组分按照对应条件保存。可拆卸酶标板、冻干标准品、浓缩生物素化检测抗体可置于 - 20℃避光保存，存放周期可达六个月；浓缩 HRP 酶结合物同样 - 20℃避光存放；样本稀释液、抗体稀释液、洗涤液、终止液、TMB 底物溶液统一 2-8℃冷藏，TMB 底物需额外避光存放。所有试剂瓶盖保持拧紧，防止液体蒸发、微生物污染，试剂分装时会预留少量余量，实验时使用移液枪定量吸取，不直接倾倒试剂。
实验完成后，依靠试剂盒自带的多组梯度标准品数值建立标准曲线，同时试剂盒出厂完成精密度验证，板内、板间重复检测变异数值均处于较低区间，样本加标回收实验覆盖血清、血浆、细胞上清三类样本，回收率区间稳定。实验室长期使用 ELISA 试剂盒时，配套高精度移液器、37℃恒温箱、450nm 滤光片酶标仪、去离子水等基础耗材，定期校准移液器精度，能够进一步提升 ELISA 试剂盒检测数据的重复性。
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